Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000
线性聚乙烯亚胺PEI MW25000

产品信息:

产品性质:

中文名：	线性聚乙烯亚胺PEI MW25000
英文名:	Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000
CAS＃:	9002-98-6,26913-06-4
分子式:	(CH2CH2NH）n
分子量	25000
规格：	100mg    1g    5g
熔点：	73-75º
溶于:	热水，低pH冷水，甲醇和乙醇。不溶于：苯，乙醚和丙酮
外观:	白色粉末（比偏黄色粉末纯度高，有更好的转染效果）
处理：	手套和通风橱
分子量：	25KD
储存：	PEI内含自由氨基，建议开封后4℃干燥保存，减缓氧化过程。

配置：

1：称取100mg线性聚乙烯亚胺，加新鲜的细胞级别的水90ml，加盐酸至PH=3左右， 加热至80℃左右搅拌过夜溶解PEI，

2：用氢氧化钠溶液调整pH值至7.0 ，定容至100ml，用0.22um的滤器过滤，分装后储存于4℃，保质期可以达到12个月。

转染操作流程(稳定转染方法)

1. 接种细胞： 转染前一天，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。

2. 准备 DNA-PEI 复合物：DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每1 μg DNA 需用 1-5 μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比，每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同）。一边轻轻涡旋装有DNA 溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如NEST 5 mL /14 mL 离心管。

3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染3 h 后，添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。

4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后最快7 h 即可检测到转入基因的表达。

5.转染24 h 后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释 10 倍 以上），在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2 周可 筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

特别提醒：

1 .PEI 25K含有4-11％的残留丙酰基，这可能阻碍聚合物主链与DNA的有效结合，所以批间转染效率可能会有比较大的差异，建议一个批次可以多购买，PEI 25K稳定性在室温干燥避光下可稳定保存10年以上（虽然有效期标注只有18个月左右）。

2. 对于某些类型的细胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 细胞，在转染前两天铺板，可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。

3. 对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。

4. 即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEM ITM 培养基以达到最佳转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。

5. 对大多数细胞来而言，每 1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI转染试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每1 μg DNA 使用 1~4 μL 体积线性PEI。

l Polyethylenimine, Linear (MW 25,000)为BIOHUB公司生产的化合物产品，每批产品出厂前都经过严格的检测,保证每批产品都100%合格、稳定且高品质,但由于作为转染试剂使用过程中有很多实验室因素(配置方法，PH,水纯度,称量的准度,dna RNA纯度,细胞状态，细胞品系…)造成溶解出现问题或者转染效率出现差异,所以厂家只受理该产品纯度，分子量及重量缺失破损等相关投诉，针对极个别客户溶解问题和转染效率问题我们只能友善解决,所以不能保证您能获得满意答复，对于产品产品转染效率不高，转染批间有差异，转染不了等问题，不作为评价我们售后工作的依据。

转染操作流程：(瞬时转染方法)

1. 接种细胞： 转染前一天，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。

2. 准备 DNA-PEI 复合物：DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。，用Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每1 μg DNA 需用 1-5 μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA 溶液 的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如NEST 5 mL /14 mL 离心管。

3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染3 h 后，添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。

4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后最快7 h 即可检测到转入基因的表达。 请自行确定最适合检测时间。

转染效果参考：

细胞种类	中文名称	PEI 转染效率
HEK293	人胚肾细胞	90%-95%
293-T	人胚肾细胞	90%-95%
CHO-K1	仓鼠卵巢细胞	80%-90%
U251	人源神经胶质瘤细胞	80%-90%
Hela	人源宫颈癌细胞	70%-80%
COS7	猴SV40转化肾细胞	70%-80%
HepG2	人源肝癌细胞	70%-80%
NIH/3T3	小鼠胚胎成纤维细胞	60%-70%
胶质瘤干细胞	人源胶质瘤干细胞	60%-70%
Patu8988	人源胰腺癌细胞	60%-70%
U2OS	人源骨肉瘤细胞	60%-70%